HPLC检测服务

三、液相色谱仪的组成

液相色谱仪主要包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。

1 输液系统：

包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、符合HPLC要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。

2 进样系统：

将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。进样系统包括取样、进样两项功能。

3 分离柱：

色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。商品化的HPLC微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。采用的固定相粒度甚至可以达到1μm，而制备色谱所采用的固定相粒度通常大于10μm。HPLC填充柱效的理论值可以达到50000/m～160000/m理论板，一般采用100-300mm的柱长可满足大多数样品的分析的需要。由于柱效内、外多种因素的影响，因此为使色谱柱达到其应有的效率。应尽量的减小系统的死体积。

4 检测系统：

HPLC检测器分为通用型检测器和专用型检测器两类。通用型检测器可连续测量色谱柱流出物（包括流动相和样品组分）的全部特性变化。这类检测仪器包括示差折光检测器、介电常数检测器、电导检测器和磁光旋转检测器。这类检测器适用范围广，但是对于流动相有响应，受温度变化、流动相流速和组成变化的影响，检测灵敏度低，不能用于梯度洗脱的分离模式。专用型检测器对样品中组分的某种物理或化学性质敏感，可用于测量被分离组分某类特性的变化。这类检测器包括紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器、放射性检测器。

5 数据处理系统：

数据处理系统可以分为数据处理系统和专用智能处理系统两类，前者可以完成一般的色谱数据处理任务，有些软件可以实现部分仪器的控制功能。前者即一般的色谱工作站，后者通常称之为专家系统。

四、仪器、试剂：

主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-20)、10μL微量注射器、滤膜

试剂：正己烷、异丙醇、待测样品

五、实验步骤：

• 准备

1. 准备所需的流动相，用合适的0.45um滤膜过滤，超声脱气20min；
2. 根据待检样品的需要选择并安装好合适的色谱柱；
3. 配置样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45um滤膜过滤；
4. 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常；
5. 开机：接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A泵、检测器，带泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。

• 参数设定

1. 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入波长值，按[enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕，也可以选择LC-solution 软件方便地设定；
2. 流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1mL/min），按[enter]键确认。按[CE]键退出，也可以选择LC-solution 软件设定；
3. 流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键,用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[enter]键确认。按[CE]键退出，也可在软件中设定。

• 更换流动相并排气泡

1. 将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中，逆时针转动A/B泵的排液阀180^o，打开排液阀，按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9mL/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止，将排液阀顺时针转到底，关闭排液阀，如管路中有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。

• 平衡系统

1. 按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相，观测泵控制屏幕上的压力值，压力波动应超过不超过1MPa。
2. 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡系统，可以进样。
3. 进样：将样品用滤膜过滤，用10uL玻璃注射器将样品液体从进样阀进样（注意，进样时，尽量不要让针头接触进样孔的壁），进好样后，进行测试，观察工作电脑桌面上液相曲线变化，测试完后停止进样，用电脑进行数据分析。

实验数据处理：